PCR技术究竟如何操作的这可是好多人心中存有的问题！咱们一点一点来讲

PCR技术需要什么材料呢

首先，要想进行PCR技术操作，那肯定呢是得准备好了一些关键的材料的。像模板DNA ，这可是非常重要的东西，就好比是盖房子得有图纸一样，它这个里面就包含了我们想要扩增的目标基因啦什么的

还有引物，如果咱们把PCR看成是沿着铁轨行驶的火车 ，这引物呀 ，就是铁轨的起始端 ，就是确定要复制基因在哪里开始 。有了它，反应才晓得从哪开场进行呢 。 再就是 dNTPs了，这可是用来合成新DNA的原料 ，没这东西不行少一样都构造不出完整精准的DNA链

Taq 酶也是个关键的 ，好比工厂里干活的工人，负责把dNTPs按照模板一点点的连接起来，对构建新的DNA链贡献太大了。它的特殊还在于耐热很牛，能在高温里稳稳地把活儿干好。

再有就是缓冲溶液这方面了哦 ，这个好比一个稳定的小环境，保证PCR反应啊要在一个合适妥当的酸碱度、镁离子浓度下才能稳定进行噢，要不这些物质在不适当的环境跑反应根本不好使的。

而且在容器和仪器装备方面，肯定是得有专门用来pcr跑起来的仪器的 。另外洁净的PCR管必不可少 ，咱们要把相关试剂都安安全全的放到这里面的

PCR技术要经过啥步骤呢

那准备好了材料以后，这接下来重要就是按流程好好操作进入各个反应流程的

一个事情呢是模板变性 ，先将含有咱们目标扩增DNA序列或者需要的这这些样品模板， 放在适当高温的环境下 ，把DNA双螺旋解开啦 ，变成两条各自独立开链链 ；在这样像融化一样，高温的状态情况下 ，氢键啦各种作用力啦都会被破坏然后链条松开来 ，准备好可以迎接新东西进来被复制这么一个过程。要是温度不够那么呢有可能就是分离不完全，就不是分成完全独立两条的，这后续很容易出问题。

之后到目标退火。退火就是让温度慢慢从刚那么高降下来点儿，正好到那个咱们预备好的引物与变性成为单链在特定条件下特异性互补 结合上来 ，就相当于是火车找到了起始的铁轨部分是很般配的位置来踏上这个旅途的 。这个过程可是有严格温度 把控的，合适的退火温度得按照引物的具体碱基组成等相关情况严格 制定计算出来的 。所以也得特别 谨慎对应才行。

下面一步啦 就是延伸了。这个延伸呢是通过上文说那些像建筑工人这个Taq酶加入新核苷酸 ，和模板配对结合产生一条与之互补链 ；逐渐形成双链的这个 DNA新 片段 。 在延伸阶段时长上一定要重视，根据扩增产物具体长度来看究竟是长时间延伸或者是短些延伸时间 ；要不然这新片段形成不对就问题大了的诶。

然后这个过程要好多轮重复呐 要多多次序来重复这样PCR循环 ，而且每一次循环的过程都必须一步一步符合标准来，在第一次循环完成之时呀新的链作为下一个环节模板参与到后续进行里面。每次循环理论上新产生DNA链数量都以指数级别数目来迅速增加。一般重复个二三十来回往往是必须的 数量。要确定这个次数 咱们这得根据本身的对模板灵敏度。想要怎样准确度情况等一系列各种各样因素综合考虑下去来判断到底要的多次？

PCR操作时都要注意些什么捏

这个在要进入实际操作PCR技术还要多清楚里面许多要很注意地方哇

操作环境要保证绝对纯，不然样品DNA就被污染这后果呢实在不堪设想的 ；在专门超静台操作环境的基础应该要有隔离外界干净且尽量可以对操作这局部做到封闭限制那样空间 ，并且要对表面用一定酒精去擦拭处理这些要做到无菌 不然外面脏东西或者其他病毒其他微生物混进去到PCR体系里面就完了就全乱套弄成一锅粥这样情况了

操作的时候呢咱们 必须 必须防止气溶胶这种产生传播的。使用的时候一些移液器枪头有专门配套上吸帽这类东西装备的 这些装置上也多想想有没有其他情况容易泄露或者产生这有害不好东西的注意防止喷出来就飘走一些对体系产生影响物质 。 样品材料必须需要预先充分混合咯才能够在运行PCR的时候效果好保证均匀性。 充分混匀才能在温度改变，操作时候稳定反应进行呀所以在放入之前需要涡旋之类仪器上处理一下做这样子晃动或者剧烈振动，避免体系局部不均一造成偏差导致结果乱七八糟难以言说得啊

设备仪器也是 要经常做好校准维护，不准确那就相当糟糕，怎么准确来反应模板相关真实问题。温度控制就是体现出很多 PCR仪好坏。因此要多特别重视按照说明书之类做好维护，并且校准好不同地方设置温度参数，就比如加热模块和实际真实目标环境里的温度差异数值然后根据差多少情况等等做细致调整

并且加样工作肯定要极度小心哇哎。必须很规范才行。移液器容量精度等等这类东西得看号选择与需求适应仪器。在整个过程应该戴着无菌手套呢而且要遵守操作步骤严格从左向右做，避免接触发生交叉在管内液体产生沾外溢，这样都防止混乱的

总之像最后进行数据分析这些结果出来 、后期结果判读的时候要理性又全面综合来看问题 ，不能单单看片面结果了事

经过这么一步步辛苦仔细的反复操作和关注那么基本上是能让PCR结果基本符合咱们想要的要求，对实验研究这方面得到帮助的

总之是需要一环接连一环做好了 ，PCR技术实验想要结果才能够在掌控范围内出，所以必须认真对才能够运用好PCR技术方法 ，让它为我们后续科研和实践服务满足一些需求做技术支持的呐